细胞培养笔记

不同的细胞，喜欢的环境是不一样的

有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞，譬如内皮细胞。而有一些细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。

巨噬细胞，生长速度非常快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且它比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长得连成一片，细胞形态就会差，老化的会比较多，对后期实验结果不好。

所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度。

养的细胞形态怎么都不好？

对于贴壁细胞，如果细胞形态不好或者细胞形态不清晰，表面似有异物等，可以在传代的时候进行如下操作：

首先，倒掉旧的培养基，加入 3 ml 新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走。然后再加入 3 ml 的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。巨噬细胞我只吹打，不消化。

其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内。培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。 10 、20 、30 分钟观察一次。选择一个时间点，在已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入 3 ml 新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。

如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。